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病毒感染性疾病具有传播速度快、影响范围广、致病机制复杂等特点，及时准确的诊断是防控疫情蔓延、指导临床治疗的关键。核酸检测凭借高特异性、高灵敏度的优势，已成为病毒感染诊断的核心技术，其流程主要包括核酸提取、扩增反应及结果分析三大环节。其中，核酸提取是去除样本中蛋白质、多糖、脂质等杂质，分离纯化目标核酸的关键步骤，提取效果直接影响后续扩增反应的特异性和灵敏度，进而影响检测结果的准确性。

一、材料与方法

（一）实验材料

1、病毒样本：选取常见RNA病毒（新型冠状病毒、甲型流感病毒H1N1亚型）和DNA病毒（人乳头瘤病毒HPV16型、EB病毒）的标准品及临床样本。其中包括咽拭子、鼻咽拭子及血液样本共200份。

2、主要仪器：博清生物核酸提取仪、同类商业化核酸提取仪（对照仪器A、对照仪器B）、荧光定量PCR仪、超微量紫外分光光度计、高速冷冻离心机。

3、试剂：磁珠法核酸提取试剂盒、对照仪器专用提取试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒（针对各病毒特异性基因设计引物和探针）、无水乙醇、Tris-HCl缓冲液等，均为分析纯或生化试剂级。

（二）实验方法

1、样本处理：将病毒标准品用生理盐水进行梯度稀释（10^1-10^6copies/mL），临床样本按照常规方法进行预处理，咽拭子和鼻咽拭子样本加入采样管中，充分振荡后取上清液；血液样本经离心分离血清后备用。

2、核酸提取：分别采用博清生物核酸提取仪、传统手工提取法及对照仪器A、对照仪器B对上述样本进行核酸提取，具体操作按照各仪器及试剂盒说明书进行。博清生物核酸提取仪的提取流程包括：样本加样、裂解液添加、磁珠结合、洗涤、洗脱等步骤，全程自动化完成，单次提取时间设置为30分钟，同时处理16份样本。

3、核酸纯度与浓度检测：采用超微量紫外分光光度计检测提取核酸的A260/A280比值（评估核酸纯度）和A260值（计算核酸浓度），每个样本重复检测3次，取平均值。

4、核酸回收率计算：根据病毒标准品的初始浓度和提取后核酸浓度，计算各方法的核酸回收率，回收率=（提取后核酸总量/初始核酸总量）×100%。

5、荧光定量PCR检测：将提取的核酸样本进行荧光定量PCR扩增，反应体系为20μL，包括PCR缓冲液、引物、探针、Taq酶及模板核酸，反应条件按照试剂盒说明书设置。以Ct值（循环阈值）作为检测指标，Ct值越小表示检测灵敏度越高，以Ct值≤38为阳性判断标准。

6、稳定性评估：选取10^3copies/mL 的病毒标准品，采用博清生物核酸提取仪进行10次批内重复提取和5次批间重复提取，通过计算核酸浓度和Ct值的变异系数（CV）评估仪器的稳定性。

二、结果

（一）核酸纯度与浓度比较

超微量紫外分光光度计检测结果显示，博清生物核酸提取仪提取的RNA病毒核酸A260/A280比值为1.85±0.06，DNA病毒核酸A260/A280比值为1.92±0.05，均处于1.8-2.0的理想范围，表明提取的核酸纯度较高，蛋白质污染较少；传统手工提取法的RNA病毒核酸A260/A280比值为1.72±0.11，DNA病毒核酸为1.78±0.09，显著低于博清生物核酸提取仪（P<0.05）；对照仪器A和对照仪器B的核酸纯度与博清生物核酸提取仪无显著差异（P>0.05）。

（二）核酸回收率分析

对于RNA病毒标准品，博清生物核酸提取仪的核酸回收率为（89.6±4.2）%，传统手工提取法为（66.3±5.1）%，对照仪器A为（85.3±4.5）%，对照仪器B为（83.7±4.8）%；博清生物核酸提取仪的回收率显著高于传统手工提取法和对照仪器B（P<0.05），与对照仪器A无显著差异（P>0.05）。

对于DNA病毒标准品，博清生物核酸提取仪的核酸回收率为（91.2±3.8）%，传统手工提取法为（70.5±4.6）%，对照仪器A为（87.5±4.1）%，对照仪器B为（86.2±4.3）%；同样，博清生物核酸提取仪的回收率显著高于传统手工提取法（P<0.05），与对照仪器A、B无显著差异（P>0.05）。

（三）检测灵敏度对比

荧光定量PCR检测结果显示，博清生物核酸提取仪提取的RNA病毒标准品最低检出浓度为10^1copies/mL，对应的Ct值为36.8±0.5；传统手工提取法的最低检出浓度为10^2copies/mL，Ct值为37.2±0.6；对照仪器A的最低检出浓度为10^1copies/mL，Ct值为37.5±0.4；对照仪器B的最低检出浓度为10^1copies/mL，Ct值为37.8±0.5。

对于DNA病毒标准品，博清生物核酸提取仪的最低检出浓度为10^1copies/mL，Ct值为36.5±0.3；传统手工提取法为10^2copies/mL，Ct值为37.0±0.4；对照仪器A和B的最低检出浓度均为10^1copies/mL，Ct值分别为37.1±0.3和37.3±0.4。统计分析表明，博清生物核酸提取仪的检测灵敏度显著高于传统手工提取法（P<0.05），与对照仪器A、B无显著差异（P>0.05），但在相同浓度下，博清生物核酸提取仪的Ct值更低，表明其提取的核酸模板质量更优。

（四）稳定性评估结果

批内稳定性测试中，博清生物核酸提取仪提取的病毒核酸浓度CV值为1.8%，Ct值CV值为2.1%；批间稳定性测试中，核酸浓度CV值为3.2%，Ct值CV值为3.5%，均显著低于传统手工提取法（批内CV值：核酸浓度4.5%、Ct值3.8%；批间CV值：核酸浓度5.2%、Ct值4.7%）（P<0.05），表明博清生物核酸提取仪的操作稳定性良好，人为误差影响较小。

（五）临床样本验证结果

200份临床样本经博清生物核酸提取仪提取后，荧光定量PCR检测阳性86例，阳性检出率43.0%；对照仪器A检测阳性82例，阳性检出率41.0%；两种仪器的检测一致性较好（Kappa值=0.89），但博清生物核酸提取仪的阳性检出率略高于对照仪器A，且在低病毒载量样本（Ct值35-38）中，博清生物核酸提取仪的检出数（12例）多于对照仪器A（8例），表明其在临床样本检测中具有更高的实用性。

三、讨论

病毒感染检测的核心在于快速、准确地获取目标病毒核酸，而核酸提取作为检测流程的首要环节，其技术水平直接影响检测结果的可靠性。磁珠法作为目前主流的核酸提取技术，凭借特异性结合核酸、分离效率高、操作简便等优势，已被广泛应用于自动化核酸提取仪中。博清生物科技（南京）有限公司研发的核酸提取仪基于磁珠法原理，通过优化提取缓冲液配方和自动化程序，实现了病毒核酸的高效提取，本研究结果充分验证了其技术优势。

在核酸纯度方面，博清生物核酸提取仪提取的核酸A260/A280比值均处于理想范围，表明其能够有效去除样本中的蛋白质等杂质，减少杂质对后续PCR扩增的抑制作用。传统手工提取法由于操作步骤繁琐，容易导致杂质残留，进而影响核酸纯度，这与本研究中手工提取法的核酸纯度较低结果一致。在提取效率上，博清生物核酸提取仪可在30分钟内完成96份样本的批量处理，显著高于传统手工提取法（单样本提取时间约60分钟），能够满足大规模样本筛查的需求，尤其适用于疫情爆发等紧急场景。

核酸回收率和检测灵敏度是评估核酸提取仪性能的关键指标。本研究中，博清生物科技（南京）有限公司研发的核酸提取仪对RNA病毒和DNA病毒的核酸回收率均显著高于传统手工提取法，且最低检出浓度达到10^1copies/mL，与同类商业化仪器相当甚至更优，表明其能够高效捕获样本中的低浓度病毒核酸，有效避免漏检。此外，该仪器的批内和批间变异系数较小，稳定性良好，能够减少不同操作人员、不同实验批次之间的误差，保证检测结果的一致性，这对于临床诊断和科研数据的可靠性至关重要。

临床样本验证结果显示，博清生物核酸提取仪的阳性检出率略高于对照仪器A，尤其在低病毒载量样本中表现更优，这可能得益于其高效的核酸回收率和较低的杂质残留，使得低浓度病毒核酸能够被有效扩增和检测。同时，该仪器的操作流程自动化程度高，无需复杂的手工操作，不仅降低了操作人员的劳动强度，还减少了交叉污染的风险，进一步提升了检测结果的准确性。

当然，本研究也存在一定局限性，如仅针对几种常见病毒进行了验证，对于其他类型病毒的提取效果仍需进一步评估；此外，样本类型主要包括咽拭子、鼻咽拭子和血液样本，对于痰液、粪便等复杂样本的提取性能还需深入研究。未来，可进一步扩大样本类型和病毒种类，开展多中心、大样本量的临床验证，为博清生物核酸提取仪的广泛应用提供更全面的依据。

博清生物科技（南京）有限公司研发的核酸提取仪采用自动化磁珠法技术，具有提取快速、纯度高、回收率高、稳定性好、检测灵敏度高等优势，能够满足病毒感染检测中核酸提取的需求。该仪器不仅简化了操作流程、提高了检测效率，还提升了检测结果的准确性和可靠性，在临床病毒感染诊断、流行病学调查及科研实验中具有重要的应用价值和推广前景。