一、研究背景

食品安全是公共卫生领域的核心议题，而微生物污染是引发食品安全问题的主要因素之一。传统微生物检测依赖平板计数法，需经过培养、分离、鉴定等步骤，检测周期长达24-72小时，难以满足食品生产过程中实时监控、快速放行及应急检测的需求。因此，开发高效、便捷的微生物快速检测技术成为食品安全领域的研究热点。

二、材料与方法

（一）检测对象

选取四类典型食品作为检测基质，覆盖不同加工类型与微生物污染风险。

1、生鲜食品：鸡肉、生菜

2、加工肉制品：火腿肠、培根

3、乳制品：鲜牛奶、酸奶

4、饮料：瓶装纯净水、果汁

（二）仪器与试剂

1、核心仪器：博清生物荧光计。

2、配套试剂：检测试剂盒。

3、对照仪器：生化培养箱、菌落计数器。

（三）实验步骤

1、样品前处理：称取25g样品，加入225mL无菌生理盐水，均质振荡10分钟，制成1:10样品匀液，根据污染情况进行梯度稀释。

2、提取：取1mL样品匀液，加入0.1mL裂解液，室温静置2分钟，裂解微生物细胞释放ATP。

3、荧光检测：向裂解后的样品中加入0.1mL荧光素-荧光素酶试剂，混匀后立即放入博清生物荧光计，检测并记录荧光信号值（RLUs）。

4、对照实验：同时采用平板计数法对样品进行微生物总量测定，37℃培养48小时后计数，结果以CFU/g（mL）表示。

5、数据校准：以平板计数法结果为基准，建立荧光信号值（RLUs）与微生物浓度（CFU/mL）的标准曲线。

（四）评价指标

1、检测时间：记录从样品前处理到获得检测结果的总时长。

2、准确性：计算荧光计检测结果与平板计数法结果的相关性系数（R²）。

3、灵敏度：确定仪器可稳定检测的最低微生物浓度。

4、重复性：对同一浓度样品进行6次平行检测，计算相对标准偏差（RSD）。

三、结果与分析

（一）检测效率对比

博清生物荧光计与传统平板计数法的检测时间差异显著。

1、博清生物荧光计：从样品前处理到出结果，总耗时仅15-20分钟，其中仪器检测环节仅需10秒。

2、传统平板计数法：需48小时培养周期，加上前处理与计数操作，总耗时超过50小时。

（二）准确性与相关性

通过对不同浓度微生物样品的检测，建立了博清生物荧光计的标准曲线。

1、标准曲线方程为：y=0.023x+12.5（y为荧光信号值RLUs，x为微生物浓度CFU/mL），相关性系数R²=0.986，表明两者具有极强的线性相关性。

2、对实际食品样品的检测结果显示，荧光计检测值与平板计数法结果的相对误差均小于10%，满足食品安全检测的准确性要求。

（三）灵敏度与重复性

1、灵敏度：博清生物荧光计的最低检测限为10²CFU/mL，可有效检出食品中低浓度微生物污染，符合食品卫生标准中对微生物限量的检测需求。

2、重复性：对10³CFU/mL、10⁵CFU/mL两个浓度梯度样品进行平行检测，相对标准偏差（RSD）分别为3.2%和2.8%，表明仪器检测重复性良好。

（四）不同食品基质适应性

在四类食品基质中，博清生物荧光计均表现出稳定的检测性能。该仪器在加工肉制品和饮料中检测性能最优，在生鲜食品和乳制品中虽受基质干扰略有影响，但仍满足快速筛查需求。

四、讨论

（一）技术优势分析

博清生物科技（南京）有限公司研发的荧光计的核心优势在于“快速”与“便捷”，可有效解决传统检测方法的滞后性问题。

1、对于食品生产企业，可实现生产线实时监控，及时发现加工过程中的微生物污染风险，减少因批次污染导致的经济损失。

2、对于监管机构，在食品安全应急事件中，可快速完成样品筛查，缩短应急响应时间，提升监管效率。

（二）与传统方法的互补性

需明确的是，ATP生物发光技术检测的是所有活细胞的总量，无法区分微生物种类。因此，博清生物荧光计更适合作为快速筛查工具，用于初步判断样品是否存在微生物污染超标的风险。当筛查结果显示异常时，仍需通过传统平板计数法或分子生物学方法进行进一步的分离鉴定，明确污染微生物种类。

（三）应用局限与改进方向

目前该技术在高基质干扰样品（如高蛋白、高脂肪食品）中，可能出现荧光信号抑制现象。未来可从两方面优化：

1、试剂层面：开发针对性的基质消除试剂，降低食品基质对检测反应的干扰。

2、仪器层面：增加自动校正功能，通过算法补偿基质带来的误差，进一步提升检测准确性。

博清生物科技（南京）有限公司研发的荧光计在食品安全微生物快速筛查中具有显著优势。其检测周期短（15-20分钟）、准确性高（R²>0.98）、灵敏度达标（最低检测限10²CFU/mL），且在多种食品基质中适应性良好。该仪器可作为食品生产过程监控、成品快速放行及应急检测的高效工具，为食品安全质量控制提供有力支撑。